细胞培养用的 Poly-L-lysine Solution (多聚 - L - 赖氨酸溶液,PLL) ,是一种带正电荷的多聚阳离子聚合物,通过静电作用促进细胞贴壁,尤其适用于原代神经元、神经胶质细胞及部分难贴壁细胞系。PLL并非单一固定分子量,而是有多个常用规格,主流集中在 70,000~300,000 Da 区间。
(1)分子量选择逻辑: 低分子量(30-70kDa):适合神经细胞等脆弱细胞,毒性低,适合短期贴壁; 中分子量(70-150kDa):通用款,适配大多数贴壁细胞; 高分子量(150-300kDa+):适合组织切片、难贴壁细胞,贴壁力强,但需注意浓度,过高易导致细胞毒性。 补充:PDL(多聚 D - 赖氨酸)不可被细胞内的蛋白酶降解,因此比 PLL 毒性更低,适合敏感细胞或长期培养。
(2)浓度选择与毒性控制 贴壁力与浓度正相关,但浓度过高会导致细胞毒性、形态异常; 敏感细胞优先用低浓度(10-20 μg/mL),或直接换用 PDL; 无血清 / 低血清培养时,需适当提高浓度(50-100 μg/mL),弥补血清中粘附因子的缺失。
(3)包被操作通用流程(可直接套用) 用无菌水 / 无血清培养基稀释 PLL 至目标浓度; 加入培养器皿(覆盖底面即可),37℃孵育 1-2 小时或 4℃过夜; 弃去包被液,用无菌水或 PBS 清洗 2 次; 可直接使用,或晾干后 4℃保存(不超过 1 周)。
附:为确保效果并避免毒性,建议遵循以下标准步骤:
配制工作液:
常用浓度:0.1 mg/mL (0.01%) 的PLL溶液是实验室中最广泛应用的起始浓度。也可根据细胞类型和文献在0.01-1 mg/mL区间内优化。
操作关键:PLL不可高温高压灭菌,所有工作液必须过滤除菌。
包被处理:以0.1 mg/mL的浓度为例,操作如下:
覆盖表面:向培养器皿中加入足量PLL溶液,确保完全覆盖底部。参考用量:T25培养瓶约2.5 mL。
孵育条件:
快速处理:室温(或37℃)静置1-2小时。
过夜处理:4℃冰箱静置过夜。
回收溶液(可选):孵育结束后,吸出的PLL溶液在无菌条件下可回收使用3-4次。
洗涤与灭菌(关键步骤):
多次洗涤:用无菌PBS或无菌水彻底冲洗包被过的表面至少2-3次。此步骤至关重要,以去除未吸附的PLL,防止其对细胞产生毒性。
检查残留:确保洗涤彻底,避免高浓度PLL局部残留导致细胞死亡。
保存备用:
洗涤后,培养器皿可自然晾干或烘干。用封口膜密封后,可在4℃ 冰箱中短期保存(建议一周内使用)。